Titulo: Clonación, expresión y caracterización de NAD quinasa de Staphylococcus aureus involucrado en la formación de NADP (H): una Molécula clave en el mantenimiento del estado redox y la formación de biofilm
GEN a clonar: NADK
Enzima de restricción: No refiere
Enzima ligasa: T4
Vector: Plásmido--- pQE30
Celula receptora: EcoliDH5α
Insercción de genes: Transformación
Identificación:
1. Cultivo
2. Electroforesis de proteínas
3. PCR
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28828348
domingo, 15 de diciembre de 2019
domingo, 8 de diciembre de 2019
ADN recombinante que sucede en la naturaleza
Es un tipo de ADN formado por dos moléculas de ADN completamente distintas, esta integrado por genes de distintos organismos de la misma o diferente especie.
La
recombinación del ADN que se observa en las bacterias se da por un
proceso llamado transformación. Las bacterias son capaces de capturar el
ADN libre, que se encuentra en el ambiente; y este puede provenir de
otras bacterias ya sea de la misma o diferente especie.
domingo, 1 de diciembre de 2019
PCR de metilación: Staphylococcus aureus
Gracias a la tecnica de PCR (MsP), en la que tras la modificación con bisulfito, se realiza una reacción de PCR usando dos sets de cebadores diseñados para amplificar el estado metilado y el no metilado por separado, gracias al cual se pudo conocer que algunas cepas de Staphylococcus aureus, poseen una metilacion ribosomal en la subunidad 23s que le confiere una resitencia a los fenicoles
Referencias bibliograficas
domingo, 24 de noviembre de 2019
Prueba de Microarray en Endocarditis
Se realiza la técnica molecular de microarray del ADN bacteriano de Staphylococcus aureus, obteniendo como resultado lo siguiente .
Diversos fenotipos bacterianos como la capacidad de S. aureus para unir fibrinógeno y fibronectina, resistencia a péptidos microbicidas, producción de biopelículas y la formación de trombos plaquetarios-bacterianos en la superficie de la válvula han sido descritos como críticos en la ocurrencia de IE.
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Referencias bibliográficas
domingo, 17 de noviembre de 2019
PCR en Endocarditis Infeciosa por Staphylococcus aureus
TEMA: Desarrollo y evaluación de un nuevo ensayo rápido de PCR y secuenciación de ADN ribosómico 16S de amplio espectro para el diagnóstico de la endocarditis infecciosa.
OBJETIVO: Explorar la sensibilidad y la especificidad de un nuevo ensayo rápido de PCR y secuenciación de rDNA 16S para el diagnóstico mejorado de endocarditis infecciosa (EI) en pacientes con sospecha de infección valvular cardíaca (HV) nativa o protésica durante un período de varios años en nuestro centro cardiovascular.
MUESTRA: Hemocultivo y tejido de válvula cardiaca.
ÁCIDO NUCLÉICO: ADNr
EXTRACCIÓN:
- SEPARACIÓN: El ADN se extrajo utilizando el protocolo QIAamp DNA Mini Kit para tejidos (QIAGEN, Hilden, Alemania).
- LISIS: Las muestras se sometieron a vórtex brevemente y se incubaron a 56 ° C, en un termomezclador Eppendorf a 1400 rpm durante un mínimo de 2 h.
- PURIFICACIÓN: El ADN en la digestión proteolítica se purificó adicionalmente de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El ADN se eluyó en 150 μL de tampón AE. Eluato de ADN se almacenó a -20 ° C hasta su uso.
GEN A AMPLIFICAR:
Gen rDNA de 16S
16SDPO_F: AGAgTTTgATCMTGGCTCA-IIIII-AACGCT (M = A / C; I = desoxinosina; 16SDPO_R: CGCGGCTGCTGGCA-IIIAI-TTRGC (R = A / G; I = desoxinosina
PCR: estándar
- Desnaturalización inicial a 95 ° C
- Hibridación: 40 ciclos de 94 ° C durante 1 minuto, 62 ° C durante 30 s, y 72 ° C durante 1 minuto.
- Extensión final a 72 ° C durante 5 min.
VISUALIZACIÓN: Electroforesis en un gel de agarosa al 1,5% que contenía SYBRsafe (Life Technologies)
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| https://image.slidesharecdn.com/presentacindepcr-140819234948-phpapp02/95/fundamentos-de-la-pcr-5-638.jpg?cb=1408492226 |
Referencias bibligraficas
domingo, 10 de noviembre de 2019
Prueba de Tamizaje y Confirmatoria de Endocarditis Infecciosa
PRUEBA DE TAMIZAJE
Algunos factores de riesgo propuestos para endocarditis infecciosa en la población adulta son: uso de drogas intravenosas, diabetes mellitus, cardiopatía estructural, presencia de prótesis valvulares, antecedente de malignidad, entre otros. Es razonable, por tanto, realizar ecocardiografía como tamizaje para endocarditis en los pacientes con válvulas protésicas que desarrollan bacteriemia a causa de microorganismos.| ttps://encrypted-tbn0.gstatic.com/images?q=tbn%3AANd9GcSo51dMRPNki3xuIfAoiuCu833CzDEKPtn9VjXp1rGld29MfXc5 |
PRUEBA CONFIRMATORIA
Actualmente el principal método para el diagnóstico etiológico de la endocarditis infecciosa sigue siendo el hemocultivo.
Se deben tomar tres (dos frascos por hemocultivo, aerobio y anaerobio) antes de instaurar el tratamiento antibiótico, el resultado de las mismas determinará si hay presencia de bacterias en el torrente sanguíneo.
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| https://conceptodefinicion.de/wp-content/uploads/2017/11/Hemocultivo-1.jpg |
Referencias Bibliograficas
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0120563318300123
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0213005X1500124X?via%3Dihub
domingo, 3 de noviembre de 2019
Alteraciones de la Epigenomica en la Endocarditis Infecciosa por Staphylococcus aureus
Mediante una prueba de Microrray de ADN se pudo identificar varios
aspectos relacionados con la genética de la Endocarditis Infecciosa que
afectaban tanto al huésped como al agente invasor. Se mostraron
resultados de fenotipos bacterianos como adherencia a componentes de
matriz extracelular, adhesión e internalización en células endoteliales,
o susceptibilidad al péptido microbicida hNP-1. Estas
asociaciones bien pueden ser marcadores sustitutos de reordenamientos
del genoma que afectan, por ejemplo, la expresión del genoma central o
que causan alteraciones epigenómicas.
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| https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1567134815003524#bb0095 |
Referencias Bibliograficas
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